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產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST

T7 gp4B protein

簡要描述:

T7 gp4B protein公司正在出售的產(chǎn)品:大鼠肝星狀細(xì)胞 磷化FANCD2封閉多肽 查菲埃立克體PCR檢測試劑盒 大鼠胃腸癌標(biāo)志物CA199ELISA試劑盒 土壤羥胺還原(HR)活性比色法檢測試劑盒 高盧根瘤菌 STRN4蛋白抗體

更新時(shí)間:2024-01-14

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T7 gp4B protein

公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

A-PJ1144

T7 gp4B protein

50 ug

描述:

T7 gp4 蛋白來源于 T7 噬菌體,是其復(fù)制系統(tǒng)的一種核心蛋白,它既具有引發(fā)酶的作用也具有解旋酶的活性,主要應(yīng)用于全基因組擴(kuò)增(WGA),且在擴(kuò)增環(huán)狀全基因組上有非常大的優(yōu)勢,常用于病毒檢測。噬菌體T7 基因 4 編碼產(chǎn)物 T7 gp4B 蛋白(T7 Gene 4,gp4),分子量 56kD,參與噬菌體的 DNA 復(fù)制。T7 gp4B 蛋白為 T7 gp4A 蛋白的截短產(chǎn)物,其蛋白 N 端的缺失導(dǎo)致該蛋白 Primase 活性缺失,但保留了解旋酶活性。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道該蛋白具有 dTTP 水解活性,其具有 5’-3’解旋酶(helicase)活性。該蛋白為基因工程產(chǎn)物,通過重組表達(dá)純化獲得的可溶產(chǎn)物。

儲存:-20℃可保存 3 年。
蛋白保存液:
20mM Tris-HCl,pH7.5
200mM NaCl
5mM DTT
25%甘油

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PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備?

試劑:
模板DNA:PCR反應(yīng)需要模板DNA,如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等;引物:PCR反應(yīng)的兩個(gè)引物,分別與模板DNA的兩端配對擴(kuò)增所需的特定區(qū)域,引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物;dNTPs:PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細(xì)胞分裂、DNA合成等生物學(xué)過程,用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增;Taq DNA聚合酶:PCR反應(yīng)需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴(kuò)增DNA鏈;PCR buffer溶液:對PCR反應(yīng)具有緩沖作用,調(diào)節(jié)反應(yīng)pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛,可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性,從而提高反應(yīng)效率;酶切體系:PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實(shí)驗(yàn)步驟,常常需要進(jìn)行酶切操作。MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn),用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物;
設(shè)備:
PCR儀:用于控制反應(yīng)溫度,保證PCR反應(yīng)時(shí)不同溫度環(huán)節(jié)的嚴(yán)格控制;電泳槽:用于分離PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;核酸提取儀:從組織樣本中全自動(dòng)提取核酸。  這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是,只有在有序齊全的基礎(chǔ)上,才能進(jìn)行PCR反應(yīng)并得出準(zhǔn)確結(jié)果。

PCR相關(guān)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn):

PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)由20到35個(gè)循環(huán)組成,每個(gè)循環(huán)包括以下3個(gè)步驟:

一、變性:

利用高溫(93-98℃)使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個(gè)循環(huán)之前,通常加熱長一些時(shí)間以確保模板和引物分離,僅以單鏈形式存在。該步驟時(shí)間1-2分鐘,接下來PCR儀就控制溫度進(jìn)入循環(huán)階段。

二、退火或稱接合,復(fù)性:

在DNA雙鏈分離后,降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點(diǎn)5℃。錯(cuò)誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯(cuò)誤地結(jié)合。該步驟時(shí)間1-2分鐘。

三、延伸:

DNA聚合酶由降溫時(shí)結(jié)合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補(bǔ)鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時(shí)間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統(tǒng)的Taq估計(jì)合成1000bp/min、較新的Tbr(來自于嗜熱菌Thermus brockianus)約40秒、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

PCR反應(yīng)條件優(yōu)化:

1、變性溫度和時(shí)間:

保證模板DNA解鏈?zhǔn)潜WC整個(gè)PCR擴(kuò)增成功的關(guān)鍵。加熱90~95°C, 30~60s,再復(fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續(xù)時(shí)間過長,可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

2、復(fù)性溫度和時(shí)間:

PCR擴(kuò)增特異性取決于復(fù)性過程中引物與模板的結(jié)合。復(fù)性溫度越高,產(chǎn)物特異性越高。復(fù)性溫度越低,產(chǎn)物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定。

3、延伸溫度和時(shí)間:

一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個(gè)核苷酸時(shí),過高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合,可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應(yīng)時(shí)間,可根據(jù)待擴(kuò)增片段的長度而定,小于1kb, 1min足夠;大于1kb需加長延伸時(shí)間。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時(shí)間。這里需要注意,延伸時(shí)間過長可能出現(xiàn)非特異擴(kuò)增。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時(shí)間。

4、循環(huán)數(shù):

其他參數(shù)選定后,PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環(huán)后,PCR產(chǎn)物的積累即可達(dá)到最大值,實(shí)際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達(dá)到100%,因此不管模板濃度是多少,20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù)。循環(huán)次數(shù)越多,非特異擴(kuò)增增加。

公司正在出售的產(chǎn)品:

豬水皰疹病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

α淀粉ELISA試劑盒 AMS/AMY免費(fèi)代測試劑

人腺病毒D74型探針法熒光定量PCR試劑盒

反芻獸埃立克體PCR檢測試劑盒直銷

低氧上調(diào)節(jié)因子1ELISA試劑盒 HYOU1免費(fèi)代測試劑

皮諾卡菌PCR檢測試劑盒價(jià)格

轉(zhuǎn)基因植物CamVS啟動(dòng)子核檢測試劑盒

胞漿型磷脂A2-αELISA試劑盒

呂氏泰勒蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

貓弓形蟲PCR檢測試劑盒

淀粉樣蛋白β前體樣蛋白2ELISA試劑盒

呂氏泰勒蟲染料法熒光定量PCR試劑盒

獼猴源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒

多肽-N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移3ELISA試劑盒

附紅細(xì)胞體屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒

諾如病毒通用染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

二甲基精氨二水解2ELISA試劑盒

腦膜炎奈瑟菌通用型(NM-U)核檢測試劑盒

諾卡菌通用PCR檢測試劑盒

泛醌蛋白3ELISA試劑盒

禽皰疹病毒通用探針法熒光定量PCR試劑盒

蒙得維的沙門氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒

芳基硫酯KELISA試劑盒

狂犬病病毒通用PCR檢測試劑盒供應(yīng)

梅恩君病毒PCR檢測試劑盒

紡錘體蛋白2ELISA試劑盒

破傷風(fēng)梭狀桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

牛源性成分(Bovine)核檢測試劑盒

封閉蛋白19ELISA試劑盒

羅斯河病毒PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

輪狀病毒 A 組核檢測試劑盒

人成纖維細(xì)胞生長因子6(FGF6)ELISA試劑盒

病毒H9N2亞型PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

腦膜炎奈瑟菌血清群W135PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

人鈣聯(lián)蛋白(CNX)ELISA檢測試劑盒

漢灘型漢坦病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

馬動(dòng)脈炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

T7 gp4B protein人白介前體(pro-IL1B)試劑盒ELISA

都柏林沙門氏菌PCR檢測試劑盒

發(fā)酵支原體探針法熒光定量PCR試劑盒

人癌胚抗原(CEA/CD66)ELISA Kit

丹毒絲菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒

促生長轉(zhuǎn)ScGH基因成分核檢測試劑盒

人酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)試劑盒 ELISA

禽偏肺病毒(aMPV)核檢測試劑盒