ELISA試劑盒的靈敏度可通過以下方法進行提升
點擊次數(shù):658 更新時間:2019-07-11
Elisa生物試驗是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中,ELISA檢測試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測。
如何提升ELISA試劑盒的靈敏度:
1、包被液稀釋的抗原(4、8、16、32、64、128ng/ml),用移液器小心將抗原液100μl加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可產(chǎn)生氣泡。每個濃度加4孔(4個復孔),對照孔4孔加入相同體積的包被液;其中兩孔加入100μl樣本。用保鮮膜包好酶標板,將酶標板放入底部墊有濕砂布的鋁盒中,放入4℃中包被過夜。
2、洗滌:將酶標板孔中的包被液傾干凈,并反扣在干凈的吸水紙上拍干,加入洗滌液洗滌進行洗滌。采用浸泡式洗滌法,將洗滌液注滿板孔,放置3min,間歇搖動,浸泡時間不隨意縮短,吸干孔內洗滌液,也可甩去洗滌液,反扣在吸水紙上拍干。重復洗滌4次。
3、封閉:在酶標板孔的底部加入封閉液200μl,室溫下封閉1h。
4、1h后將酶標板孔中的封閉液傾倒干凈,并反扣在干凈的吸水紙上拍干,然后每孔中加入一抗使用液100μl,注意將抗體液加在酶標板孔的底部,避免加在孔壁上部。用保鮮膜包好酶標板,將酶標板放入底部墊有濕砂布的鋁盒中,并在鋁盒中放一裝有少量水的燒杯,在37℃溫箱中放置2h。
5、2h后取出酶標板,傾倒干凈酶標板孔中的一抗溶液,并反扣在干凈的吸水紙上拍干。洗滌4次,洗滌方法同2。
6、在酶標板孔中加入梅標二抗1:4000倍稀釋的溶液100μl,加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可產(chǎn)生氣泡。用保鮮膜包好酶標板,將其放入底部墊有濕砂布的鋁盒中,并在鋁盒中放一裝有少量水的燒杯,在37℃溫箱中放置1h。
7、取出酶標板,傾倒干凈孔中的二抗溶液,并反扣在干凈的吸水紙上拍干,按2洗滌方法洗滌4次。
8、在酶標板每孔中加入底物A液50μl,底物B液50μl,反應15min~20min后,在每孔中加入反應中止液50μl,在中止反應后15min時在酶標儀上于450nm處測定OD值。