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培養(yǎng)凍存的細胞具體過程:
(1) 將一管細胞從液氮罐中取出,注意保護手和眼睛。
(2) 將凍存管快速的放入37℃水浴中,輕輕握住并旋轉,直到管內物體*融化。
(3) 將凍存管立即從水浴中拿出,擦干,轉入無菌環(huán)境。
(4) 用70%的酒精沖洗凍存管,然后擦去多余酒精。
(5) 打開蓋子,注意手指不要碰到里面的螺紋(注意,由于凍存管有負壓,開蓋時可能會有少量溢出,這是正?,F象)。
(6) 用多聚賴氨酸(或參照說明書)包被培養(yǎng)瓶。多數細胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個細胞。
(7) 蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子,輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細胞分布均勻。若需要氣體交換可打開蓋子。
(8) 將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中(37℃,5%CO2,95%空氣)
(9) 放入培養(yǎng)箱后第6-16小時更換一次培養(yǎng)基,以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細胞。